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              技術文章

              多了解一些,才能更好地運用凋亡試劑盒點擊次數:27 發布時間:2022-07-12

                凋亡試劑盒的細胞凋亡過程中可觀察到系列形態學特征和生化特征。早期凋亡信號的效應產生于胞內,此時細胞膜保持完整。目前已有幾種方法以檢測凋亡細胞胞內的多種效應,包括:DNA段的檢測、膜對稱性的變化、caspases激活、以及細胞死亡相關蛋白水平的變化等。多數檢測使用的底物和Marker適用于絕大多數種類的哺乳動物。
               
                凋亡細胞染色體DNA以核小體為單位的切割導致細胞不可逆死亡??梢圆捎肗ucleosomeELISA,對產生的單體及寡聚核DNA段進行定量。核小體的DNA成分被捕獲于酶標板上,使用標記的抗組蛋白抗體檢測捕獲的核小體數量。組蛋白-DNA段的量反應了一個特定樣品中死亡及瀕臨死亡的細胞的量。
               
                DNA段也可通過片段末端標記進行原位檢測,MERCK提供基于TUNEL方法的試劑盒。DNA段末端標記可通過熒光染料或比色底物方法進行檢測。另外,細胞形態的變化如胞膜皺摺或出泡、核染色質致密、胞質濃縮等,都可作為細胞凋亡的證據。采用熒光染料進行末端標記的可用流式細胞技術進行定量,其光散射變化也可支持由單一參數得出的結論。DNA段可以從凋亡細胞中分離并使用瓊脂糖電泳進行分析。約180bp的多倍寡核小體片段在電泳上呈典型的梯狀條帶,可進一步證實凋亡的存在。若使用PelletPaintCo-Precipitant,只需室溫操作,兩分鐘即幫助DNA沉淀更快捷方便。
               
                線粒體膜電位和膜通透性的變化也是凋亡細胞一個重要特點。凋亡細胞另一個生化特征是細胞膜內側的磷脂酰*從胞質轉至胞外。膜聯蛋白中的AnnexinⅤ,是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰有強親和力。通過使用AnnexinⅤ-FITC(PF032)或AnnexinⅤ-BiotinApoptosisDetectionKit,及RAPIDTM方法進行凋亡細胞早期檢測??墒褂昧魇郊毎麅x或熒光顯微鏡監測。同時使用PI,根據細胞膜的通透性區分早期凋亡細胞和壞死細胞。
               
                凋亡試劑盒的凋亡過程中細胞核同樣發生了結構變化。接收到凋亡信號后,核基質蛋白(NMPs)釋放。NMP的釋放與細胞死亡相,MERCK的CellDeathDetection(NMP)ELISA可定量檢測細胞培養上清中的NMP水平變化。此種檢測方法優于其它方法的原因在于可以直接檢測組織培養基中NMPs的水平,而不需細胞總裂解物,從而避免了細胞計數和樣品準備等操作。除了結構變化,凋亡細胞*水平會降低,可通過GlutathioneApoptosisAssayKit進行檢測。
               
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